色譜柱常采用內(nèi)壁經(jīng)過精密加工拋光的不銹鋼管,以獲得高柱效。不銹鋼管耐溶劑、水和緩沖溶液的腐蝕,使用前色譜柱先用氯仿、甲醇和水依次清洗,再用50%的hno3對(duì)柱內(nèi)壁作鈍化處理。鈍化時(shí)使hno3在色譜柱中至少滯留10min,以在柱內(nèi)壁形成鈍化的氧化物涂層。
色譜柱也采用氟塑料、玻璃和玻璃襯里材料,主要是從抗腐蝕和易加工方面考慮。
色譜柱連接方式:
色譜柱接頭通過過濾片與色譜柱管連接,在色譜柱管的上下兩端安裝過濾片。過濾片一般用多孔不銹鋼燒結(jié)材料制成,過濾片上的孔徑小于填料顆粒直徑,可阻擋流動(dòng)相中極小的機(jī)械雜質(zhì)以保護(hù)色譜柱,但流動(dòng)相可順利通過。柱入口和柱出口的連接管的死體積越小越好,一般常用窄孔厚壁不銹鋼管,以減少柱外死體積。
色譜柱的再生:
一般情況下,硅膠和ods等化學(xué)鍵合固定相再生是困難的。有時(shí)采用下述方法可能提高柱效。
1、由于雜質(zhì)微粒等因素,使色譜柱上端固定相變色,柱效下降。這時(shí),可仔細(xì)地將變色部分除去約3mm左右,再補(bǔ)充新的固定相。
2、當(dāng)色譜柱吸附未被洗脫的成分時(shí),柱效將明顯下降,可選擇合適的溶劑洗凈。
3、當(dāng)采用梯度洗脫時(shí),色譜柱在重復(fù)使用前,用泵把幾倍于柱體積的起始溶劑壓經(jīng)色譜柱,以重新建立起始的平衡來得到再生。
色譜柱至少可以使用3~6個(gè)月,能完成數(shù)百次分離。但若操作不慎,將很容易損壞色譜柱而不能使用。因此為了保持柱效、柱容量和滲透性,必須對(duì)色譜柱進(jìn)行仔細(xì)保養(yǎng)。