哈嘍,小伙伴們,還記得上個世紀五、六十年代震驚世界的“反應(yīng)停事件"嗎?反應(yīng)停學名為沙利度胺Thalidomide,結(jié)構(gòu)見下圖,其消旋體曾被用作緩解妊娠反應(yīng)的藥物。但是后來才發(fā)現(xiàn)其中的R-型異構(gòu)體才是有效的抗嘔吐成分,可減輕妊娠e心、嘔吐等癥狀;而S-型異構(gòu)體則會導致嬰兒畸形,結(jié)果當時在西德、荷蘭和日本等地區(qū)產(chǎn)生了大批的畸形兒。
隨著生物工程和生命科學的發(fā)展,科學家已經(jīng)認識到,手性化合物例如手性藥物異構(gòu)體盡管其物理和化學性質(zhì)幾乎wan全相同,只有旋光性不同,但它們在生物體內(nèi)的生理活性和藥理作用卻存在很大的差別。為此,制藥行業(yè)中,必須對有效成分的對映體進行拆分,而不能將其混合物作為藥物出售。
采用液相色譜法分離手性化合物,是目前shou選方法之一,要考慮手性柱的固定相類型、分離模式及流動相溶劑。現(xiàn)在市面上手性固定相類型較多,手性色譜有正相分離和反相分離兩種模式,流動相溶劑的選擇與固定相、樣品性質(zhì)、分離模式有關(guān)。今天,小編就和大家聊聊,如何選擇合適的手性分離模式。
當樣品溶于非極性溶劑中,選擇正相分離模式。常用的流動相組合是烷烴類和醇類。其中,醇類起到了洗脫作用,烷烴類用來調(diào)節(jié)流動相的洗脫強度。
烷烴類試劑,可選擇正己烷、正戊烷、異己烷、正庚烷,它們對樣品分離沒有太大影響,不會改變選擇性和分離度,選擇正己烷較多。
流動相中的醇類,對目標物的分離起關(guān)鍵作用,不同的醇有不同的選擇性,且隨著流動相中醇類的比例提高,目標峰的保留時間縮短。zui常用的醇類是乙醇和異丙醇,它們的洗脫能力是:乙醇>異丙醇。甲醇在烷烴中的溶解性不好,正己烷中甲醇的最大含量是5%。如果要在烷烴中加入甲醇,最好同時加入一定量的乙醇,提高流動相的溶解性。
在手性色譜中,為改善目標物的峰形,需要在流動相中添加酸或者堿。如果目標物是酸性化合物,往往要在流動相中加入酸性添加劑,如三氟yi酸、乙酸、甲酸等。如果目標物是堿性化合物,要在流動相中加入堿性添加劑,如二乙胺、三乙胺、丁胺、乙醇胺等。酸性或堿性添加劑的加入量一般為0.1%~0.3%,最大不超過0.5%,要注意色譜柱的pH耐受范圍。
需要注意的是:
1、正相色譜柱安裝前,必須先用合適的流動相沖洗整個儀器管路,包括進樣器。有些試劑(如丙酮、氯仿、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亞砜、乙酸乙酯、二氯甲烷、THF)會破壞手性固定相的結(jié)構(gòu),請不要使用這些溶劑作為流動相的組成部分,或者作為樣品稀釋劑。如果有無法確定的,請咨詢廠家。
2、色譜柱能使用純甲醇或者純乙腈作為流動相,如果要將正己烷換成甲醇或者乙腈,或者換成其他極性溶劑,需要用純異丙醇作為溶劑充分過渡。
3、正相手性柱應(yīng)避開含水的流動相。
溴甲ji苯異丙酸消旋體的測定
液相條件
色譜柱:Ultimate® Cellu-J(4.6×250mm,5μm) 。
流動相:正己烷:乙醇:三氟yi酸(90:10:0.1);
檢測波長:220nm;
柱溫:25℃;
流速:1mL/min;
進樣量:10μL;
樣品配置:1mg/mL,乙醇/正己烷(1/1)溶解。
如果樣品溶于含水極性溶劑時,選擇反相分離模式。常用的流動相組合是有機相和水相。其中,水相用來調(diào)節(jié)流動相的洗脫強度,常用的水相可以是磷酸鹽緩沖液,或者是純水。有機相起到了洗脫作用,常用的有機相是乙腈、甲醇、乙醇、異丙醇等,且有機相比例越高,目標物的保留時間越短。
鹽酸達泊xi汀的測定
液相條件
色譜柱:Ultimate® Cellu-JR(4.6×250mm,5μm) 。
流動相:甲醇:乙醇:二乙胺(95:5:0.1);
檢測波長:220nm;
柱溫:20℃;
流速:0.6mL/min;
進樣量:5μL;
樣品配置:1mg/mL,甲醇溶解。
目前,月旭科技的手性固定相填料包括 Cellu-D、Cellu-J、Amy-D等,可以滿足絕大多數(shù)手性樣品分離需求。各位小伙伴有手性樣品分離或需要篩選柱子,歡迎聯(lián)系月旭售前技術(shù)熱線或當?shù)劁N售。