非水反相色譜法(NARP)為反相色譜法的一種特殊模式,主要用來分離疏水性很強(qiáng)不溶于水的樣品如脂類、合成聚合物等,這些樣品的保留能力很強(qiáng),流動相全部由有機(jī)溶劑組成,不使用強(qiáng)極性的水溶液。非水反相高效液相色譜法可做為脂溶性藥物和非極性含氮有機(jī)化合物及其鹽類藥物的常規(guī)分析方法[1],中藥中的一大類有效成分脂溶性大,不溶于水,甚至也難溶于甲醇,因此非水反相色譜也常應(yīng)用于中藥質(zhì)量控制[2]。
月旭科技色譜柱應(yīng)用于某中藥配方顆粒中甘油酯類樣品分析案例如下:
非水反相色譜中的流動相是由極性較強(qiáng)的有機(jī)溶劑A和極性較弱的有機(jī)溶劑B組成。A溶劑常用乙腈或甲醇,B溶劑常用四氫呋喃、異丙醇、二氯甲烷、甲基叔丁基醚或者其他極性較弱的有機(jī)溶劑。
非水反相色譜法方法優(yōu)化同反相色譜法,主要通過改變%B或B溶劑的極性來調(diào)節(jié),等度或梯度都能使用,同時柱溫對樣品的分離也有影響。一般shou選采用ACN(A)和THF(B)的混合溶劑為作為初始流動相。若用100%THF樣品保留仍太強(qiáng),可以用極性較弱B溶劑(如二氯甲烷或氯仿)來替換,但是要考慮使用二氯甲烷或氯仿的檢測波長。
需注意,在使用非水反相色譜時,需要將整個系統(tǒng)和色譜柱中的水相徹di沖洗過渡,儀器系統(tǒng)應(yīng)保證已升級到正相,避免硬件損傷。
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[1] 《非水反相高效液相色譜法在非極性藥物分析中的應(yīng)用研究》
[2]《非水反相液相色譜法在中藥質(zhì)量控制中的應(yīng)用》