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021-50276769想做制備液相，但無(wú)從下手，
拿到了小試結(jié)果，可不知道怎么放大，
制備結(jié)果不符合預(yù)期要求卻不知道原因，
這是為什么呢？
那么，我們一起來(lái)往下看吧……
大家都知道，制備型（Prep）色譜是以分離、富集和純化為目的，以供進(jìn)一步使用。
通常為了進(jìn)行有效的制備型分離，需要了解如下信息：
1.組成
樣品大概有多少個(gè)組分；
分離的目標(biāo)組分有哪些（一定要明確）；
2.純度
目標(biāo)組分的純度要求是多少；
對(duì)于制備型分離，對(duì)產(chǎn)品通常都有一定的純度要求，也就是說(shuō)并不是所有的分離都要求產(chǎn)品純度達(dá)到100%，目標(biāo)組分只要能達(dá)到我們具體的科研或是生產(chǎn)的純度要求就可以了。如微量的天然產(chǎn)物將其富集到大約70%的含量就可以進(jìn)行初步鑒定；供核磁及紅外測(cè)試的樣品純度只要達(dá)到95%左右就可以達(dá)到要求；做定量分析用的標(biāo)準(zhǔn)品其含量至少要在99%以上；而一些生物活性物和一些生物活性物質(zhì)只需要除去其中的有害成分，并且它們的純度并不用含量來(lái)表示，而是用活力這個(gè)概念。只有了解產(chǎn)品純度的要求，我們才能在制備型分離中，建立起合適的方法。
3.復(fù)雜性
干擾物質(zhì)有哪些（盡可能了解，便于復(fù)雜樣品的前處理）；
4.性質(zhì)
樣品的物理或化學(xué)性質(zhì)（化學(xué)結(jié)構(gòu)、溶解性、酸堿性、化合物的檢測(cè)方式）；
目標(biāo)組分的物理或化學(xué)性質(zhì)（同上）；
對(duì)于目標(biāo)組分，如果是未知化合物，則需要了解大致有哪些特征的官能團(tuán)，如羥基、羧基、氨基、苯環(huán)、含氮雜環(huán)等，最終的目的都是了解化合物的極性大小（logP值）和化合物的酸堿性（pKa值）。這兩個(gè)參數(shù)往往決定了在制備液相色譜方法開(kāi)發(fā)中固定相和流動(dòng)相的類(lèi)型。
5.價(jià)值
原料是否易得、是否昂貴；
所分離的目標(biāo)物價(jià)值又如何？
只有掌握了樣品的這些初步情況，才能使我們后面分離方法的建立有的放矢，選擇合適的固定相和流動(dòng)相，挑選一只分析柱（如4.6mm*250的分析型柱子，使用10μm的制備級(jí)填料）進(jìn)行方法摸索，并進(jìn)行優(yōu)化。
優(yōu)化步驟可以簡(jiǎn)單的歸納如下：
選擇最佳的高效液相色譜分離條件
在分析型的設(shè)備條件下
摸索制備型分離方法
放大到制備型的規(guī)模上
進(jìn)行制備型分離
收集餾分
在分析型的液相色譜儀器上
檢測(cè)產(chǎn)品純度，
如果不符合要求，重新在分析型
液相色譜儀器上改進(jìn)分離條件
合并相同組分
如果有需要的話(huà)，
可以再進(jìn)一步提純產(chǎn)品
收集目標(biāo)物
看到這，有的小伙伴可能有疑問(wèn)了，為什么不直接在制備柱上去摸索呢？因?yàn)橹苯釉谥苽渲厦鳁l件，規(guī)模變大，如果方法條件不合適，沒(méi)有獲得希望的純度，會(huì)造成樣品和試劑的多種浪費(fèi)，時(shí)間長(zhǎng)了還容易造成制備柱的損壞。需要注意的是，依據(jù)分析柱上摸索的方法，最好選擇與分析柱相同品牌的填料的制備柱，以免摸索好的方法在制備柱上無(wú)法重現(xiàn)。
下圖為幾款月旭科技用于小試和中試的WelPackerDAC動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱產(chǎn)品。
不同內(nèi)徑的制備柱都有自己載樣量范圍。如果上樣量過(guò)小，則洗脫效率降低；如果上樣量過(guò)高，則樣品在柱內(nèi)過(guò)載，可能與雜質(zhì)無(wú)法得到有效分離即被直接洗脫流出。這里需要說(shuō)明一點(diǎn)的是，由于大多數(shù)的制備型色譜都是在適量過(guò)載的情況下工作的，而在該條件下色譜柱的柱效是呈指數(shù)下降的，對(duì)于制備色譜柱過(guò)分追求小粒徑填料是得不償失的，如5μm粒徑填料的成本比10μm粒徑填料高好多。
制備色譜柱的使用壽命主要取決于柱子的質(zhì)量、樣品的性質(zhì)和干凈程度。對(duì)于高價(jià)值的DAC來(lái)講，延長(zhǎng)柱子壽命是很重要的。一般來(lái)說(shuō)，DAC需要配套制備型在線過(guò)濾器防止顆粒物堵塞制備柱。
下圖為幾款月旭科技常見(jiàn)的制備型在線過(guò)濾器。
月旭科技提供專(zhuān)業(yè)的方法開(kāi)發(fā)，提供量身定制整體制備色譜解決方案，以滿(mǎn)足復(fù)雜的探索和業(yè)務(wù)需求，幫助您發(fā)現(xiàn)新方法來(lái)克服操作和數(shù)據(jù)挑戰(zhàn)。
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